抗呼吸道合胞病毒药

 

一、体外试验：

1. 病毒：呼吸道合胞病毒（RSV）标准毒株Long株和临床分离病毒细胞培养液。

2. 细胞：Hela，Vero，Hep2细胞。

3. 阳性对照药物：病毒唑。

4. 病毒毒力测定：Hela，Hep2或Vero细胞单层培养板，接种10倍稀释病毒，培养后观察细胞病变，计算TCID₅₀。

5. 药物毒性测定：在单层细胞培养板中测定7天药物半数中毒剂量TC₅₀及最大耐受量TC₀。

6. 抗病毒试验：单层细胞培养板感染100TCID₅₀ RSV病毒，2小时后，加入最大耐受量以下2倍稀释7个浓度药液，培养后观察细胞病变（CPE），设病毒对照，药物对照，阳性药物对照和细胞对照，计算药物50%抑制浓度IC₅₀和治疗指数TI。

二、体内试验：

1. 病毒：呼吸道合胞病毒（RSV）标准毒株Long株和临床分离病毒细胞培养液。

2. 动物：6周龄BaIb/c小鼠，棉鼠亦可，同批实验同性别。

3. 阳性药物：病毒唑。

4. 病毒毒力测定：乙醚麻醉Balb/c鼠，用细胞培养病毒滴鼻感染，原液每鼻孔50ul或1:5稀释0.2ml，观察发病情况。第8天杀剖小鼠，取血清测抗RSV抗体，取鼠肺观察肺病变，将10%鼠肺悬液上清，在Hela细胞培养中测定病毒TCID₅₀。

5. 药物毒性测定：不同浓度药液按给药途径在Balb/c小鼠中测定急性毒性LD₀、 LD₅₀及亚急性毒性LD₀及LD₅₀。

6. 药物抗病毒试验：麻醉Balb/c小鼠后滴鼻感染病毒原液，每鼻孔50ul， 4小时后给药，用LD₀以下3个剂量组给药8天。设病毒对照，药物对照和阳性药物对照组，给药后第8天杀剖小鼠，取血分离血清，用ELISA法测定抗RSV抗体。观察肺病变和测定肺悬液在Hela细胞中病毒滴度（TCID₅₀），与对照组比较，计算抑制%和半数有效量，作统计学处理，判断药效。