药物体外筛选研究

吸收试验

肠道吸收/Pgp结合试验

Caco-2/PAMPA、双向转运分析、肠道渗透性、Pgp底物/抑制剂确认

透皮吸收

动物皮肤、皮肤渗透性

分布试验

血浆蛋白结合

不同种属血浆、平衡透析法/超过滤法、分子排阻、血浆药物稳定性、不同种属比较研究

全血分布

不同血液成分的药物浓度分析（全血/血浆浓度比）、血液药物稳定性

代谢研究

细胞色素P450抑制实验

人肝微粒体以及cDNA表达酶、CYP亚型: 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1 & 3A4、标准底物、IC50，Ki、时间依赖性抑制(TDI)

细胞色素P450诱导实验

新鲜肝脏及人肝细胞、CYP同工酶: 1A2, 2C9, 2C19, 3A4等

药物代谢产物

不同种属的肝细胞、肝代谢稳定性研究、LC-MS/MS 进行代谢产物鉴定及结构确认、种属间比较研究

在大鼠、犬、小型猪、猴等啮齿类、非啮齿类动物体内开展大、小分子药物的ADME，检测手段包括LC-MS/MS(n)，RT-PCR, ELISA。

物料平衡实验

采集各种组织、器官；短期、长期饲养使用代谢笼；

组织分布的定量研究

组织采集与分离、LC-MS/MS检测/QPCR检测；

胆汁排泄

大鼠胆管插管技术；

代谢产物鉴定

LC-MS(n)分析尿/粪/血浆/胆汁样本；

分析手段

LC-MS/MS(n)，ELISAs/CBA ，HPLC-UV/RID，Q-PCR/RT-PCR

体外试验项目

原理

水溶性分析

通过测试不同pH缓冲液体系下药物的浓度来评价其水溶性。检测方法：应用紫外可见光光度计或LC/MS/MS测试药物浓度，评价其稳定性。

油水分配系数

通过测试化合物在辛醇与缓冲液中的比率，来评价其油水分配系数。检测方法：样品经稀释后，应用LC/MS/MS测试药物浓度，计算LogD。

溶液稳定性分析

通过测试不同pH下药物的变化量来评价其在溶液中的稳定性。检测方法：应用紫外可见光光度计或LC/MS/MS测试药物浓度，评价其稳定性。

血浆/全血稳定性分析

药物可能会被血浆或全血中的水解酶水解或在血浆与全血的pH环境下不稳定，通过测试不同时间、不同温度下原型药物的变化来评价药物在血浆或全血中的稳定性。检测方法：选择合适的样品处理方法，应用LC/MS/MS测试药物浓度，评价其稳定性。

血浆蛋白结合率

药物与血浆蛋白结合，结合型药物分子量增大，不能跨膜转运，通过测试膜两侧药物浓度，计算血浆蛋白结合率。检测方法：待膜两侧药物达到平衡后，选择合适的样品处理方法除去蛋白，应用LC/MS/MS测试药物浓度。

渗透性

Caco-2细胞模型是一种药物离体口服特性筛选模型，可用于评价药物的渗透与吸收机理。检测方法：在细胞培养条件下，生长在多孔的可渗透聚碳酸酯膜上的细胞可融合并分化为肠上皮细胞，形成连续的单层，加入药物后，待两侧体系平衡，取两侧溶液，应用LC/MS/MS测试细胞两侧浓度。

平行板人工膜渗透分析模型（PAMPA）

利用磷脂卵磷脂膜模拟细胞膜，评价药物的渗透与吸收特性，筛选药物的速度更快捷，同时其避开了苛刻的细胞实验，总体的检测费用比Caco-2模型大大减少。检测方法：按要求制备人工膜，药物在膜两侧达到平衡后，应用紫外可见分光光度计或LC/MS/MS为检测手段，测试膜两侧药物浓度。

体外药物代谢

肝微粒体/S9/细胞代谢稳定性、CYP亚型代谢稳定性、代谢产物的鉴定