性激素同化激素类药

与已知标准激素类药物比较，确定试药的激素作用谱、特点、强度，根据临床适应症作有关药效学。经统计学处理有显著性差异（p<0. 05）且经过三次重复实验证明后，才可评定试药有效。试验动物随机分组，每组动物大鼠8-12只，小鼠10-15只，兔3-4只。

一、雌激素活性的测定

（1）阴道细胞角化法：

选用切除双侧卵巢1周后的成熟小鼠或大鼠，给药后，根据动物阴道角化细胞多少，以1-1V级表示作用强度，根据角化细胞持续天数分析药物作用时间的长短。

（2）阴道开口法：

选用21日龄大鼠或小鼠，在阴道口周围注射试药，SC或ig试药后，观察阴道口开闭情况。

（3）幼鼠子宫增重法：

常用小鼠或大鼠，结果用10g体重的子宫mg数表示。如试药的剂量反应曲线与标准品的不相平行，则不能用此法计算相对效力；雌激素和孕激素在较大剂量时也有子宫增重作用，故此法的特异性较差，可以同时以阴道开口及阴道角化细胞来判定实验结果。

以上三种方法均可用于抗堆激素活性的测定。唯阳性药物组与空白对照组均给适当剂量已知标准阳性药物或溶剂，实验药物组同时给予不同剂量试药，根据结果求出ED₅₀。

（4）放射受体分析法测定激素受体的相对结合亲和力（RBA）：

将去卵巢一周后的成年雌兔子宫，制备胞浆受体液，在定量受体和定量5H-雌激素的反应系统中，加入药物 （至少5个浓度），测定与受体结合的标记激素量，即可得到剂量反应的置换曲线，用回归方程算出IC₅₀，标准品的IC50与试药的IC₅₀之比×100即为RBA值。

二、孕激素活性的测定

（1）子宫内膜反应：

选用末成熟雌兔（0. 6-0.8kg），结果按Mcphail氏法将子宫内膜腺体增生反应分为0-4级，求其平均值。

（2）蜕膜瘤形成实验：

选用假孕大鼠或小鼠，在其一侧子宫角穿线使产生蜕膜反应，最后分别按下式计算对照组和给药组每100g体重的蜕膜瘤增重量（均数士标准差）

（3）子宫二氨氧化酶活性（DAO）测定：

大鼠（150-170g），去卵巢10天后开始给药，连续7天，于给药第四日在子宫穿线使产生蜕膜反应，停药第二日取子宫，测定其DAO活性作为孕激素活性的定量指标。若观察试药有否抗孕激素活性，以上几种方法均可以在给试药时与黄体酮（0.1-1mg·kg^-1·d^-1）同时给子受试动物。

（4）大鼠维持妊娠试验：

选用妊娠大鼠，在妊娠第7日开始给试药，在妊娠第8日作卵巢切除术，并继续每天给药到妊娠第12日，在第21日解剖观察胎数和着床点，按下列计算净成功指数。

（5）放射受体测定法：

制备兔子宫胞浆受体液，³H-孕激素作为放射配体。参见一（4）法。

三、雄激素活性测定

（1）去势大鼠前列腺和精囊重量法：

选用未成年大鼠，切除双侧睾丸后一周，开始给试药，停药后第2日称取腹侧前列腺和精囊湿重，其重重以每100g体重的mg数表示。丙酸率丸酮0.5-2mg·鼠-1·d^-1作为SC或im比较的标准药物，甲基睾丸素2-10mg作为ig比较的标准药物。若欲观察雄激素活性的维持时间，可于去势后一次给药，每隔 1-2周解剖一组动物，直至作用消失为止。观察试药的抗雄激素作用，可将标准品与试药同时给予受试动物，以观察雄激素活性是否被抑制，抑制程度和挣续时间。

（2）放射受体分析法：

制备成年大鼠前列腺胞浆受体液，进行药物对⁵H-雄激素与受体结合的竞争试验。参见一（4）法。

四、同化激素活性实验

大白鼠提肛肌法：选用未成年雄鼠，切除睾丸后20天分别给予受试药或已知雄激素（常用丙酸睾丸酮0.5-1mg·鼠^-1，im或SC），停药后第2日分离提肛肌和前列腺称重。常以提肛肌/前列腺重量比值表示药物的活性。

五、促性腺激素活性测定

1. LH活性的测定：

（1）排卵诱发试验：选用动情周期规则的成年大鼠，于动情前期给药，次日收集输卵管卵子并计数。如用数个不同剂量，可得剂量反应曲线，求出ED₅₀。

（2） 性腺内分泌功能试验：选用成年雄大鼠，或有条件可用摘除垂体雄大鼠，按实验要求给药。在给药前及给药后不同时间取血，用RIA测定血中睾丸酮水平，可观察药物促进性腺分泌激素的时相变化。标准品可用LH100μg·kg^-1SC。
若观察药物的抗LH作用，以上两种测试方法可将标准品与试药同时给予受试动物。

（3）LH放射生物测定法：此方法特异性强，有条件可选用此法。选用10周龄L615小鼠，取出睾丸，制备间质细胞悬浮液，加入试药（5个浓度）温育3小时后，用RIA法测定培养液中睾酮浓度，从标准品剂量反应曲线折算试药LH活性。

（4）放射受体分析法：制备成年大鼠睾丸细胞膜受体液，进行药物对¹²⁵1—LH与受体结合的竞争试验。参见（—）4方法

2. FSH活性的测定：

（1）大鼠卵巢增重法：有条件可选用摘除垂体的健康成年大鼠，末次给药后次日，摘取卵巢称重。

（2）代偿法卵巢增生抑制试验可用于抗促性腺激素活性测定：选用成年雄大鼠，观察药物对切除一侧卵巢后另一侧卵巢代偿性肥大的抑制百分率，以反映试药抑制FSH的作用。

（3）FSH放射生物测定法即颗粒细胞芳香酶生物测定法（GAB法）：选用23-30日龄大鼠，SC DES 0. 5mg/只×4d，分离采集卵泡颗粒细胞与试药（5个浓度）进行细胞培养后，用RIA法测定培液中雌激素浓度，从FSH剂量反应曲线析算试药FSH活性。此方法难度大，有条件可选用。

（4）放射受体分析法：细胞膜受体液与LH相同，¹²⁵1—FSH作为放射配体。参见（1）4方法。

六、GnRH及其类似物的活性试验

（1）排卵诱发试验：参见五（2）方法。

（2）幼鼠子宫增重法：参见一（3）方法。用此法可比较激动剂的相对效应。

（3）垂体内分泌功能试验：用成年去卵巢大鼠，经雄、孕激素预处理后，按实验要求给药，于给药前及给药后不同时间取血，用RIA测定血中LH量。在戊巴比妥或乌拉坦（对LH释放无明显影响）麻醉下，将导管插入颈静脉后埋植于皮下，可反复取血，观察药物作用持续时间。

（4）性腺内分泌功能试验：参见五（1）2方法。用RIA测定血中睾丸酮水平。标准品可选用LHRH 1μg·kg^-1SC。