抗肾炎药

抗肾炎药的药效学研究，一般情况下方法一为必做实验，方法二及方法三中可任选一种。

一、家免Masugi肾炎模型

本模型为抗肾小球基底膜肾炎模型。预先制备羊抗兔的抗肾血清，取 2-2. 5kg家兔，处死后取出肾脏，插入导管，用生理盐水反复冲洗后，取肾皮质5g研成匀浆，与弗氏完全佐剂混匀成10ml，加生理盐水20ml，制成混悬液。给绵羊皮下或肌肉分5处注射。每处1ml，2周1次，共4次。末次注射后2周，采羊血分离血清，加入经生理盐水洗涤3次的等量免疫红细胞，混匀。置于4℃过夜使之充分吸附，离心弃除已吸附有杂抗体的血细胞，吸取上清液，于56℃水浴中0.5h灭活备用。即抗肾血清。
Masugi肾炎模型的制备：用上述抗肾血清，给2-2.5kg家兔，每次iv. 1.5-2ml，每半小时/次，约3-8次，直至出现蛋白尿，说明模型形成。

实验分组：肾炎模型组均注射抗肾血清。新药组分三个剂量组，阳性对照药组可选用0. 1mg/kg地塞米松，每日1次，或6mg/kg环磷酰胺 ，每日1次；阴性对照组用等量的生理盐水；正常组不注射抗肾血清，仅用等量的生理盐水。每组用动物至少6只。一般用药5-15天。

评价指标：

（1）尿蛋白定量：注射抗肾血清前测—次。确认肾炎形成后，每日测一次。

（2）血肌酐及血尿素氮：注射抗肾血清前测一次，确认肾炎形成后及实验结束前各测一次。

（3）病理学检查：实验结束时，取肾脏进行肾切片（HE染色）光镜检查。每例各选5个最大切面的肾小球，计量肾小球直径和细胞数，求均值及标准差。有条件时做电镜或免疫荧光显微镜检查。

二、家兔C-BSA （阳离子化牛血清白蛋白）肾炎模型

本模型为异种血清免疫复合物型肾炎模型。C—BSA肾炎模型的制备：

1. 取67ml无水乙二胺（EDA）液，加500ml重蒸馏水，再加350ml 6NHCI，调整pH到4.75，冷却至25℃。搅拌，加入5g天然牛血清白蛋白（N-BSA）溶于25ml重蒸馏水的溶液，搅拌后，再加1.8g碳化二亚胺（EDC），维持25℃，持续搅拌2h，保持pH4.75，最后加4M（pH4.75）醋酸盐缓冲液30ml，终止反应。

2. 将上述溶液冷冻干燥，在4℃重蒸馏水中透析48h，得BSA粉剂，保存于-40℃备用。

3. 取上述粉剂，加pH7.4磷酸盐缓冲液，即阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA，等电点8.6，pH=7.4，带阳离子）临用前配制

4. 取体重2-2.5Kg家兔，雌雄均可，肾炎模型组C-BSA 10mg iv。每天1次共5周，每6周注射剂重加倍。正常组不做任何处理。用C-BSA 6周后，肾小球直径为：肾炎模型组125.3±3.3微米，正常组89.2±2.2微米，每个肾小球的细胞数肾炎模型组89.2±3.9个，正常组63.4±2.3个。

实验分组及评价指标：同Masugi肾炎模型。实验可延长1-4周，每周测1-3次。

三、大白鼠Heymann肾炎模型：       

本模型为同种免疫复合物型肾炎模型。Heymann肾炎模型的制备：取150-200g左右的大白鼠，处死后取出肾脏插入导管，用生理盐水反复冲洗后，取肾皮质5g研成匀浆与弗氏完全佐剂混匀成10ml，加20ml生理盐水，给同种大白鼠做腹腔内注射，两周1次，每次2ml，约3-6次，直至出现蛋白尿，说明模型形成。

实验分组及评价指标：同Masugi肾炎模型。实验可延长1-4周，每周测1-3次。