抗溃疡药

各种溃疡模型在制备过程中，均需要禁食，各模型要求的禁食时间不尽相同，因其对溃疡程度的影响比较大，可根据需要进行调整，最好单笼饥饿并将铁丝笼放置于架子上，以防相互吃毛或吃鼠粪。所述模型中，只有慢性乙酸烧灼型溃疡为治疗性给药，其余为预防性给药。在造模型过程中若需要手术时，应注意无菌操作尤其是乙酸烧灼法造模实验，否则易发生感染性炎症或粘连。

由于到目前为止，对胃粘膜损伤程度的评价，仍是半定量状态，因此在测量胃粘膜损伤程度时，最好采用双盲法，实验人员经过培训操作熟练，以减少误差。亦可应用其它方法。一般应以原料药进行药效学评价，给药方法应采用拟推荐临床应用的给药方法。溶于水的药物配成水溶液或生理盐水溶液，可作注射给药，难溶于水或不溶于水的药物加入助溶剂或制成混悬液口服给药。

一、水浸应激性胃溃疡动物模型

选用小鼠或大鼠，按性别、体重随机分组。禁食24小时，自由饮水，然后将动物装入特制铁丝笼内，垂直浸入23±0.5℃水中。浸入深度平动物剑突水平 ，24小时后取出，颈椎脱位处死。打开腹腔，结扎门贲和幽门并经胃壁向胃腔内注入2mL 1%的甲醛溶液（大鼠8ml），将胃取出浸入甲醛溶液中，30分钟后沿胃大弯剖开，计数腺胃部出现的小鼠溃疡点数目或大鼠溃疡指数，解剖显微镜下测量胃粘膜损伤长度（mm），以其总和作为遗疡指数，在各组间进行比较。

二、乙酸烧灼型胃溃疡模型

选用大鼠，实验前禁食24小时，自由饮水，乙醚麻醉下打开腹腔，将内径5mm长30mm的玻璃管垂直放置于胃体部浆膜面上，向管腔内加入冰乙酸0.2mL， 1.5分钟后用棉签蘸出冰乙酸，缝合手术切口，术后正常饮食。第二天随机设立对照组与给药组，连续给药10-15天。解剖取出胃，用甲醛固定，测量溃疡面积，或以微量注射器用注水法测量溃疡体积，各组间进行比较

三、幽门结扎型胃溃疡模型

选用大鼠，雌雄兼用，随机分组，禁食36-72小时，自由饮水，乙醚麻醉，打开腹腔，结扎幽门。术后18小时解剖取胃，向胃腔内注入8ml1%甲醛溶液。将胃浸入1%福尔马林溶液中，10分钟后，沿胃大弯剪开胃，观察前胃部溃疡的发生情况。遗疡程度的评价，可以计数前胃部溃疡的面积，以其总和作为溃疡指数；也常用okabe法，在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只鼠溃疡面积的总和分为5个等级，作为溃疡指数。
                                                                  表1  溃疡指数的计算方式

根据溃疡指数可进一步计算：

四、乙醇致胃粘膜损伤模型

选用健康大鼠，按性别，体重随机分组，禁食48小时，自由饮水，实验时灌服无水乙醇（1mL/只），1小时后解剖取胃，以1%甲醛溶液固定。损伤程度以溃疡指数表示。条素状损伤的长度大于1mm者测量其长度，每mm计1分，若其宽度大于1mm者将其计分加倍。计分总数为该动物的溃疡指数，各组间对比。

五、利血平溃疡模型

选用小鼠，按性别、体重随机分组，禁食24小时后经皮下注10mg/kg利血平。6小时后颈椎脱位处死动物，解剖取胃，标本固定及腺胃部溃疡计数方法等同应激性溃疡。

六、胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶的測定：

1. 胃液量和胃液酸度的测定：

收集幽门结扎后4-6小时的大鼠胃液，以1000—2000g离心约5分钟，去除食物残渣等胃内容物，以容量适宜的量筒准确称量胃液量。以酸度计或pH试纸测量胃液的酸度。

2. 游离盐酸及总酸度测定试剂

（1）0. 1mol/L氢氧化钠溶液

（2）游离盐酸指示剂：0.5%的对二甲基偶氮萃胺乙醇溶液

（3）总酸指示剂：0.5%的95%酚酞乙醇溶液

方法：

（1）量取胃液5ml，置于三角烧瓶中加等量蒸馏水，混合均匀。

（2）加入游离酸指示剂及总酸指示剂各2滴，混合胃液中若含有盐酸，呈樱红色。

（3）用滴定管滴加0. 1mo/L的NaOH，边加边播动烧瓶，至红色消失，开始出现桔黄色为止，即为游离盐酸的终点。记下用去NaOH溶液的毫升数。

（4）继续滴加0. 1mol/L NaOH至红色不再变深为止，即为总酸度的终点。记下两次滴定用去NaOH溶液总量。

3. 胃蛋白酶活性测定

（1）麦特的毛细管法

将内径1-2mm粗细匀称的毛细玻管截成10cm长，洗净烤干，取适量蛋清充分打匀后用纱布过滤，将上述毛细玻璃管利用虹吸作用，灌满蛋清，置于85℃热蒸气中使蛋白质凝固。待冷却后，取出用石蜡将蛋白管两端封固，贮冰箱中备用。实验时取胃液1ml放入50mi的三角烧瓶中，加0. 05N盐酸溶液15ml，摇匀，放进约长2.0cm蛋白管二根。塞好瓶口，放于37℃恒温箱中温孵24小时，用尺测量蛋白管两端透明部分的长度（mm），以四端之值求其平均值。

胃蛋白酶的单位=平均值²×16

（2）取幽门结扎术后6小时的离心胃液0. Iml，加入1ml 1%牛血清白蛋白（0.1N HCL配制），37℃温孵20分钟，加入2ml1%三氯乙酸，在沸水中加热5分钟，冷却后过滤。取0.2ml滤出液，加入0.8ml 0. 125 N Na₂CO₃,溶液，同时加入Folin—Ciocalteu试剂（5ml甲液和0.5ml乙液），混匀静置30分钟后比色（700nm）。以酪氨酸标准曲线计算胃蛋白酶活性。以mmol/h酪氨酸表示胃蛋白酶排出量。