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生物医药研发公共服务平台创新驱动企业

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胶原

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鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明

【产品名称】鼠尾胶原蛋白Ⅰ型( Rat tail tendon collagen Type Ⅰ)

【产品介绍】

本产品通过混合酶法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的,可以用于包被细胞培养器
皿,培养一些在普通细胞培养皿中不易贴壁的细胞,也可以用于制备三维胶,模拟真实的生长环境,使细胞在三
维环境中生长。

【质量保证】

本产品来源于S P F级别的S D大鼠鼠尾腱,所有饲养S D大鼠无特定病原体,原料来源安全、可靠、原料供应充足
且均一性好。本中心上级主管部门为广东省卫生厅,产品质量可靠、有保证。

【特       色】

SPF级别的胶原蛋白来源 专业的动物饲 养环境 高纯度的I型胶原蛋白 体外细胞培养的利器。

【使用方法】

1、细胞壁培养皿的表面包被推荐浓度:1 - 5 u g / c m2

以包被浓度为2 u g / c m 为例:用无菌0 . 0 0 6 m o l / L(0 . 3 6 g / L)乙酸将胶原蛋白稀释到0 . 0 1 2 m g / m l。按表(一)体积加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,开盖在超净台上过夜晾干。也可以在室温放置1小时后,用P B S洗3 - 4次后直接使用或晾干.包被好的器皿在4 - 2 5℃至少可保存3个月以上的时间。

 

表面积( c m2 ,每孔或每皿)

加入0 . 0 1 2 m g / m l胶原的体积

9 6孔细胞培养板

0.3

50 

2 4孔细胞培养板

1.9

300

1 2孔细胞培养板

3.8

600

6孔细胞培养板

9.5

1580

3 5 m m细胞培养皿

8

1330

6 0 m m细胞培养皿

21

3500

1 0 0 m m细胞培养皿

55

9170

2、三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1 m g / m l以上,p H = 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1 - 2 m g / m l。鼠尾胶原蛋白溶解于0 . 0 0 6 m o l / L乙酸中,在成胶过程中需要加入0 . 0 6 X体积0 . 1 m o l / L N a O H来中和。

需要的溶液(均需要无菌、预冷):

1 0 x P B S(可含1 0 m g / L的酚红用于p H指示),或1 0 x培养液

0 . 1 m o l / L N a O H,0 . 1 m o l / L 乙酸(一般不用),双蒸水

A . 不含细胞的三尾胶原的制备(以配制1毫升,1 m g / m l三维胶为例):将2 0 0 u l鼠尾胶原蛋白I型(5 m g / m l)加到置于冰浴的离心管中,加入6 9 0 u l H O。然后加到1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H中(如果反过来把1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H加到胶原溶液中,会由于N a O H不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即加入1 0 0 u l 1 0 x P B S或1 0 x培养液,混匀后立即加到培养皿中(混匀后p H为7左右,如果P B S或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用p H试纸测试)。将培养器皿在室温下放置2 0分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配置中使用的是1 0 x P B S,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B .含细胞的三维胶原的制备(以配置1毫升,1 m g / m l三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将2 0 0 u l鼠尾胶原蛋白I型(5 m g / m l)加到1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H中(如果反过来把1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H加到胶原溶液中,会由于N a O H不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入2 3 u l 1 0 x P B S或1 0 x培养液,混匀(混匀后p H为7左右,如果P B S或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用p H试纸测试)。加入7 6 0 u l的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养皿中。将培养器皿在室温下放置2 0分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。

注:鼠尾胶原蛋白I型在室温下p H中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温(检测报告)。

2019年9月4日 09:56
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