辅助改善记忆功能动物试验评价方法

1 试验项目

1.1  动物实验

1.1.1  体重

1.1.2  被动行为试验：跳台实验，避暗实验

1.1.3  主动行为试验：穿梭箱实验，水迷宫实验，Morris水迷宫实验

2  试验原则

2.1  动物实验和人体试食试验为必做项目。

2.2  动物实验强调被动行为试验和主动行为试验的组合，以保证实验结果的可靠性。

2.3  动物实验至少应选择三项实验，并且在被动行为试验、主动行为试验中至少要各选一项实验。

2.4  正常动物与记忆障碍模型动物任选其一。

2.5  动物实验应重复一次（重新饲养动物，重复所做实验）。

3 实验方法

3.1 动物选择

推荐使用近交系小鼠，断乳鼠或成年鼠（18—22g），用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠，单一性别，每组10-15只。实验必须进行受试样品对正常小鼠记忆（或条件反射）的影响以及受试样品对记忆障碍模型小鼠（或条件反射）的影响的实验。

3.2 动物实验

3.2.1 跳台实验

反应箱底铺有通36v电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h 或48h 重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min 内的错误总数。停止训练5天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。

3.2.2 避暗法

利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连，暗室底部铺有通电的铜栅，并与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。小鼠进入暗室受到电击，计时自动停止。

3.2.3 穿梭箱实验（双向回避实验）

以光(或声)、电击为联合刺激，使实验动物由被动回避建立主动的条件反射。记录此条件反射建立过程中的主动回避反应指标可反应实验动物的学习、记忆能力的变化。

3.2.4 水迷宫实验

动物都有一种“探索”和“更替”倾向，当离开一个臂时，总是跑向“久”未跑过的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而寻找能爬出水面的阶梯，训练后，小鼠能记住找到阶梯的路线。

4  动物实验结果判定

被动行为试验(跳台实验、避暗实验)二项实验中任一项实验结果阳性，主动行为试验（穿梭箱、水迷宫、Morris水迷宫实验）三项实验中任一项实验结果阳性，且重复实验结果一致（所重复的同一项实验两次结果均为阳性），可以判定该受试样品有助于改善记忆功能动物实验阳性。

记忆测试指标一览表

	测试项目	评价指标	所用仪器
被动行为试验	跳台实验	被动回避时间、错误次数和动物、出现错误反应百分率	跳台仪
	避暗实验		避暗仪
主动行为试验	穿梭箱实验	主动回避时间、被动回避时间、主动回避率	穿梭箱
	水迷宫实验	到达安全台的时间和达标所需的训练次数、动物出现错误反应的动物百分率	水迷宫自动记录仪
	Morris水迷宫实验	逃避潜伏期、上台前游泳路程、平台象限活动时间占总时间百分比、平台象限活动路程占总距离百分比、站台穿越次数、90s内站上平台动物百分率	Morris水迷宫实验系统